消化法中常使用的酶有3種：胰蛋白酶、膠原酶I或Ⅱ以及透明質(zhì)酸酶，透明質(zhì)酸酶多與胰蛋白酶或膠原酶聯(lián)合應(yīng)用； 膠原酶作用較緩和，能消化細(xì)胞間質(zhì)中的膠原纖維以釋放細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞損傷小，以膠原I為主。

胰蛋白酶（簡(jiǎn)稱(chēng)胰酶）是廣泛應(yīng)用的消化劑.胰蛋白酶是一種胰臟制品,對(duì)蛋白質(zhì)有水介作用,主要作用于賴(lài)氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開(kāi),在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同,對(duì)細(xì)胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的作用,取決于細(xì)胞類(lèi)型、酶的活力、配制的濃度、消化的溫度、無(wú)機(jī)鹽離子、pH以及消化時(shí)間的長(zhǎng)短等. 胰蛋白酶作用較強(qiáng)，容易造成平滑肌細(xì)胞損壞；
膠原酶是一種從細(xì)菌中提取出來(lái)的酶,對(duì)膠原有很強(qiáng)的消化作用.適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對(duì)細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡(jiǎn)便又可提高細(xì)胞成活率,zui終濃度200u/mL  此酶消化作用緩和,無(wú)需機(jī)械振蕩,但膠原酶價(jià)格較高,大量使用將增加實(shí)驗(yàn)成本,所以選擇價(jià)廉物美的膠原酶是關(guān)鍵.

膠原酶的化學(xué)名為膠原蛋白水解酶(Collagenase)，它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，因此，這對(duì)溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

膠原酶（collagenase）是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí)，用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差，這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類(lèi)型選擇膠原酶類(lèi)型。

中文名稱(chēng)： I型膠原酶、II型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶

英文名稱(chēng)：Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

CAS號(hào): 9001-12-1

規(guī)格：100mg, 1g ,5

產(chǎn)地：Worthington sigma  invitrogen

外觀: 棕色或棕褐色結(jié)晶狀凍干粉；

保存：-20°C

膠原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意標(biāo)簽中的活性單位,zui終配制 成為200u/mL就可以了.,

胰蛋白酶的配制、過(guò)濾除菌與分裝過(guò)程

準(zhǔn)備樣品：干粉，PBS緩沖液，離心管兩個(gè)、凍存管20個(gè)、盒子一個(gè)、槍頭1盒、滅菌器、注射器。

準(zhǔn)備工作：將離心管、凍存管裝載盒子中高溫高壓滅菌。

配制：

1.稱(chēng)取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度0.25％用電子天平準(zhǔn)確稱(chēng)取粉劑50mg溶入離心管PBS（PH到7.2左右）液中。攪拌混勻，置于4℃內(nèi)過(guò)一晚。

2.用注射濾器抽濾消毒：配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器（0.22微米微孔濾膜）抽濾除菌。

3.分裝：將除菌之后的胰蛋白酶用移液槍分裝至

A: Collagenase I（膠原酶I型） :  主要用于上皮、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。

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B: Collagenase II（膠原酶II型） : 適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織細(xì)胞的分離。

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C: Collagenase III（膠原酶 III型） 對(duì)哺乳動(dòng)物的組織有廣譜的消化作用

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D: Collagenase IV（膠原酶IV型）:膠原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織, 對(duì)哺乳動(dòng)物的組織有廣譜的消化作用。

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E: Collagenase V（膠原酶V型）: 膠原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，結(jié)締組織分離。

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